Ενα καλόμικροσκόπιοπρέπει να έχει τρία χαρακτηριστικά:
Καλή ανάλυση: Η ικανότητα ανάλυσης αναφέρεται στην ικανότητα δημιουργίας ξεχωριστών εικόνων από κοντά τοποθετημένα αντικείμενα, έτσι ώστε να μπορούν να διακριθούν ως δύο ξεχωριστές οντότητες. Ανάλυση:
Περίπου 0,2 mm (200μm) με γυμνό μάτι
Το οπτικό μικροσκόπιο είναι περίπου 0,2μm
Το ηλεκτρονικό μικροσκόπιο είναι περίπου 0,5 nm
. Η ανάλυση εξαρτάται από τον δείκτη διάθλασης. Το λάδι έχει υψηλότερο δείκτη διάθλασης από τον αέρα.
Καλή αντίθεση: μπορεί να βελτιωθεί περαιτέρω με χρώση του δείγματος.
Καλή μεγέθυνση: Αυτό επιτυγχάνεται με τη χρήση κοίλων φακών.
Brightfield ή μικροσκοπία φωτός
Το Brightfield ή το μικροσκόπιο φωτός παράγει σκοτεινές εικόνες σε πιο ανοιχτό φόντο.
μικροσκοπία σκοτεινού πεδίου
Αρχή: Στη μικροσκοπία σκοτεινού πεδίου, τα αντικείμενα εμφανίζονται φωτεινά σε σκούρο φόντο. Αυτό μπορεί να επιτευχθεί με τη χρήση ειδικών συμπυκνωτών σκοτεινού πεδίου.
Εφαρμογές: Χρησιμοποιείται για τον εντοπισμό βιώσιμων, μη χρωματισμένων κυττάρων και λεπτών βακτηρίων όπως οι σπειροχαίτες που δεν μπορούν να παρατηρηθούν με μικροσκόπιο φωτός.
μικροσκόπιο αντίθεσης φάσης
Οπτικοποιεί τα ζωντανά κύτταρα δημιουργώντας διαφορές αντίθεσης μεταξύ των κυττάρων και του νερού. Μετατρέπει τις ανεπαίσθητες διαφορές στον δείκτη διάθλασης και την κυτταρική πυκνότητα σε εύκολα ανιχνεύσιμες αλλαγές στην ένταση του φωτός.
Χρήσιμο για μελέτη:
μικροβιακή κίνηση
Προσδιορίστε το σχήμα των ζωντανών κυττάρων
Ανιχνεύστε βακτηριακά συστατικά όπως ενδοσπόρια και σωμάτια εγκλεισμού.
Μικροσκόπιο φθορισμού
Πώς λειτουργεί: Όταν οι φθορίζουσες βαφές εκτίθενται στο υπεριώδες φως (UV), διεγείρονται και φθορίζουν, δηλαδή μετατρέπουν αυτήν την αόρατη ακτίνα μικρού μήκους κύματος σε φως μεγαλύτερου μήκους κύματος (ορατό φως).
Εφαρμογές: Η μικροσκοπία επιφθορισμού έχει τις ακόλουθες εφαρμογές:
Αυτοφθορίζει όταν τοποθετείται κάτω από υπεριώδη ακτινοβολία, όπως η κυκλοσπορίνη
Μικροοργανισμοί επικαλυμμένοι με φθορίζουσες βαφές, όπως το atriol orange για τα παράσιτα της ελονοσίας (QBC) και η αουρινόλη για το Mycobacterium tuberculosis.
Ανοσοφθορισμός: Χρησιμοποιεί αντισώματα επισημασμένα με φθορίζουσες βαφές για την ανίχνευση αντιγόνων κυτταρικής επιφάνειας ή αντισωμάτων που συνδέονται με αντιγόνα κυτταρικής επιφάνειας. Υπάρχουν τρεις τύποι: άμεσο IF, έμμεσο IF και κυτταρομετρία ροής.
ηλεκτρονικό μικροσκόπιο
Εφευρέθηκε από τον Ernst Ruska το 1931. Διαφέρει από τη μικροσκοπία φωτός με διαφορετικό τρόπο.
Υπάρχουν δύο τύποι EM:
EM μετάδοσης (τύπος MC, εξετάζει την εσωτερική δομή, ανάλυση 0.5 nm, δίνει δισδιάστατη προβολή)
Σάρωση EM (εξετάζει την επιφάνεια με ανάλυση 7 nm, παρέχοντας τρισδιάστατη προβολή)
Αρχές ηλεκτρονικής μικροσκοπίας μετάδοσης
Προετοιμασία δείγματος: Εκτελέστε τα ακόλουθα βήματα στα κύτταρα για να προετοιμάσετε πολύ λεπτά δείγματα (πάχους 20 έως 100 nm)
Στερέωση: Στερεώστε τα κύτταρα χρησιμοποιώντας γλουταραλδεΰδη ή τετροξείδιο για να τα σταθεροποιήσετε.
Αφυδάτωση: Το δείγμα στη συνέχεια αφυδατώνεται χρησιμοποιώντας έναν οργανικό διαλύτη όπως ακετόνη ή αιθανόλη.
Ενσωμάτωση: Το δείγμα είναι ενσωματωμένο σε ένα πλαστικό πολυμερές, το οποίο στη συνέχεια σκληραίνει για να σχηματίσει μια στερεή μάζα. Τα περισσότερα πλαστικά πολυμερή είναι αδιάλυτα στο νερό. Επομένως, τα δείγματα πρέπει να αφυδατωθούν πλήρως πριν από την ενσωμάτωση.
Τομή: Το δείγμα στη συνέχεια κόβεται σε λεπτές τομές με υπερμικρότομο και τα τμήματα τοποθετούνται σε μεταλλικές πλάκες (χάλκινο).
Τεχνική κατάψυξης: Αυτή είναι μια εναλλακτική μέθοδος για την οπτικοποίηση οργανιδίων μέσα στα κύτταρα για την προετοιμασία του δείγματος.
Τα κύτταρα καταψύχονται γρήγορα, μετά θερμαίνονται → σπάνε χρησιμοποιώντας ένα μαχαίρι για να εκτεθούν τα εσωτερικά οργανίδια → εξαχνώνονται → καλύπτονται με επικαλύψεις πλατίνας και άνθρακα.
Τα μέτρα για τη βελτίωση της αντίθεσης EM περιλαμβάνουν:
Χρώση με διαλύματα αλάτων βαρέων μετάλλων όπως κιτρικό μόλυβδο και οξικό ουρανύλιο
Αρνητική χρώση με βαρέα μέταλλα όπως φωσφοβολφραμικό οξύ ή οξικό ουρανύλιο.
Σκίαση: Το δείγμα επικαλύπτεται με ένα λεπτό φιλμ από πλατίνα ή άλλο βαρύ μέταλλο υπό γωνία 45 μοιρών, έτσι ώστε το μέταλλο να χτυπά τους μικροοργανισμούς μόνο στη μία πλευρά.
